產(chǎn)品型號(hào)：VEGF

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

所在地：上海市

更新時(shí)間：2016-05-30

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

您購(gòu)買的兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒如有質(zhì)量問(wèn)題，我們承諾免費(fèi)包退換

試驗(yàn)原理

ELISA檢測(cè)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。

產(chǎn)品規(guī)格

規(guī)格     可測(cè)樣數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)孔 空白對(duì)照     產(chǎn)地 庫(kù)存

96T      85個(gè)樣    10       1         進(jìn)口 現(xiàn)貨

48T      37個(gè)樣    10       1         進(jìn)口 現(xiàn)貨

自備材料

1）蒸餾水。

2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振蕩器及磁力攪拌器等。

試劑盒組成

樣品收集、處理及保存方法

1）血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量shengli鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備

1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。 每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物 素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3   次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。

1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒安全性

1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2）實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份

試劑盒選擇
◎衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品，試劑應(yīng)從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡(jiǎn)便性，安全性及經(jīng)濟(jì)性作出全面的評(píng)價(jià)。
◎靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力；2)為試劑對(duì)人群或大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力(假陰性越少越好) ，取決于包被物的全面性。
◎特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力(無(wú)假陽(yáng)性)，取決于包被抗原(體)及標(biāo)記抗原(體)
的純度及特異性。
◎精密度：ELISA 試劑一般指其批內(nèi)CV，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍試劑盒選擇
◎穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測(cè)定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開(kāi)始下降為止，通常認(rèn)為 37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10
℃保存一個(gè)半月。
◎簡(jiǎn)便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好，在定性試驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了，)定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單。
◎安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無(wú)害無(wú)傳染性。
◎經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。
試劑盒評(píng)價(jià)
◎試劑評(píng)價(jià)需要有的血清考核盤( Panel)進(jìn)行檢測(cè)，一般實(shí)驗(yàn)室不易從生檢所或臨檢中心取得，每進(jìn)一次試劑評(píng)價(jià)一次也很麻煩。可以通過(guò)間接的信息對(duì)試劑進(jìn)行選擇。
◎根據(jù)該試劑生檢所批批檢定報(bào)告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計(jì)劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；
◎通過(guò)詢問(wèn)試劑包被物的組成，如原料來(lái)源(基因工程或合成多肽)，片段的組合(按比例混合或化學(xué)合成)，片段的長(zhǎng)短等判斷試劑的優(yōu)劣；
◎參考室間質(zhì)評(píng)評(píng)價(jià)報(bào)告中對(duì)試劑的評(píng)價(jià)結(jié)果，這比較客觀公正，因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)數(shù)字均來(lái)自各參評(píng)醫(yī)院，反映了試劑在某一地區(qū)的使用情況；
◎根據(jù)部門發(fā)布的試劑評(píng)價(jià)結(jié)果，了解市場(chǎng)上試劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。
儀器質(zhì)控
為使儀器保持*工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)，所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)，水浴箱(溫箱)，洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。
◎移液器：ELISA 加樣量小(5-100ｕl)，其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬(wàn)分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確，一般應(yīng)在±10%以內(nèi)；
◎水浴箱 經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實(shí)測(cè)溫度是否*，允許有±1℃的誤差；
◎洗板機(jī) 每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過(guò)2ul ，人工扣板時(shí)，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；
◎酶標(biāo)儀 經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測(cè)校正，使其保持良好的工作性能。
附1：酶標(biāo)儀校正程序
◎?yàn)V光片波長(zhǎng)精度檢查：將不同波長(zhǎng)的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用UV-2201 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(波長(zhǎng)精度±0.3nm)于可見(jiàn)光區(qū)對(duì)每個(gè)濾光片進(jìn)行掃描，其檢測(cè)值與標(biāo)定值之差為濾光片波長(zhǎng)精度。
◎通噵差與孔間差檢測(cè)：通道差檢測(cè)是取一只酶標(biāo)板小孔杯(杯底須光滑，透明，無(wú)污染以酶標(biāo)板架作載體，將其(內(nèi)含200ul 甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A 左右)置于8 個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸溜水調(diào)零，1 于490nm處連續(xù)測(cè)三次 ,觀察其不同通道的檢測(cè)器測(cè)量結(jié)果的*性，可用極差值來(lái)表示。孔間差的測(cè)量是選擇同
一廠家，同一批號(hào)酶標(biāo)2 板條(8 條共96 孔)分別加入 200ul 甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.100A 左右)先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm 處檢測(cè)，其誤差大小用±1.96s 衡量。n 零點(diǎn)飄移(穩(wěn)定性觀察)：取8 只小孔杯分別置于8 個(gè)通道的相應(yīng)位置，均加入200ul 蒸溜水并調(diào)零，于490nm 處每隔30 分鐘測(cè)一次，觀察各個(gè)通道4 小時(shí)內(nèi)吸光度的變化。
附 1：酶標(biāo)儀校正程序
◎精密度評(píng)價(jià)：每個(gè)通道3 只小杯分別加入200ul 高中低3 種不同．濃度的甲基橙溶解，蒸溜水調(diào)零，于490nm作雙份平行測(cè)定，每日測(cè)二次(上下午各一次)，連續(xù)測(cè)定 20 天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV 值。
◎線性測(cè)定：用電子天平精確稱取甲基橙配制 5 個(gè)系列的溶液，于490nm 平行測(cè)8 次，取其均值。計(jì)算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差 s，并用±1.96s 表示樣品測(cè)量的誤差范圍.雙波長(zhǎng)測(cè)定評(píng)價(jià)：取一分甲基橙溶液，分別加入3 種不同濃度的溶血液(測(cè)定波長(zhǎng)為 490nm，校正波長(zhǎng)為585nm)，先后于8 個(gè)通道
檢測(cè)，每個(gè)通道測(cè)3 次，51 比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以考察雙波長(zhǎng)消除干擾組分的效果。
◎一般酶標(biāo)儀無(wú) 585nm 濾光片，可選用550nm 或630nm 濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長(zhǎng)為630nm)

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒說(shuō)明 
1. 在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4. 濃洗滌液會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。 
5. 剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。 
6. 中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不*之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
8. 有效期：6個(gè)月