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2025-10-16
一、抗原修復(fù)不充分原因：甲醛固定導(dǎo)致抗原表位交聯(lián)封閉，或修復(fù)液pH值錯(cuò)誤、時(shí)間不足。解決：使用pH6.0檸檬酸鹽緩沖液（多數(shù)抗體適用）。高壓修復(fù)（121℃,2~3分鐘）優(yōu)于微波修復(fù)。二、一抗問(wèn)題原因：濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短或抗體失效。解決：進(jìn)行濃度梯度測(cè)試（如1:50~1:400）。設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照驗(yàn)證抗體活性。三、組織固定不當(dāng)原因：固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（48小時(shí)）或固定液濃度過(guò)高。解決：推薦10%中性福爾馬林固定6~24小時(shí)。及時(shí)固定（大標(biāo)本需切開(kāi)）。四、操作失誤原因：組織干燥、切片過(guò)...2025-09-30
1.細(xì)胞身份要驗(yàn)明正身新細(xì)胞到貨先做"DNA指紋"（STR鑒定），避免被其他細(xì)胞冒充觀察細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞像鋪路石，成纖維細(xì)胞像蜘蛛網(wǎng)2.無(wú)菌操作三原則酒精擦手后要晾干（酒精會(huì)殺死細(xì)胞！）開(kāi)瓶前用火焰燎一下瓶口（像燒烤簽消毒）換液時(shí)想象在給細(xì)胞滴眼藥水（動(dòng)作要輕柔）3.傳代就像分蛋糕胰酶消化時(shí)盯著看，細(xì)胞變圓就馬上終止（像煮餃子看火候）凍存細(xì)胞要加"防凍劑"（DMSO），提前配好冰盒里的"羽絨服"（凍存盒）4.污染急救包細(xì)菌污染：用雙抗（青霉素+鏈霉素）當(dāng)"抗生素"霉菌污染：...2025-09-16
一、抗體使用規(guī)范與保存策略1.接收與預(yù)處理離心操作：4℃條件下12,000rpm離心3分鐘（體積分裝原則：按單次使用量分裝（≥10μl/份），避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的活性損失特殊類型處理：腹水抗體需立即凍存（含蛋白酶易降解）熒光標(biāo)記抗體需全程避光操作2.保存條件優(yōu)化長(zhǎng)期保存：-20℃（普通抗體）或-80℃（珍貴抗體），添加50%甘油可降低凍融損傷短期保存：4℃不超過(guò)2周，置于冰箱內(nèi)層遠(yuǎn)離除霜區(qū)防腐措施：0.02%疊氮鈉可抑制微生物生長(zhǎng)（活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)禁用）二、重組蛋白使用規(guī)范與保存策略...2025-09-12
一、定義細(xì)胞裂解（CellLysis）是生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中的基礎(chǔ)技術(shù)，指通過(guò)物理、化學(xué)或生物方法破壞細(xì)胞膜/壁結(jié)構(gòu)，釋放胞內(nèi)成分的過(guò)程。二、裂解機(jī)制與原理1.細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征不同生物細(xì)胞具有特異性結(jié)構(gòu)：原核細(xì)胞：肽聚糖細(xì)胞壁（革蘭氏陽(yáng)性菌含磷壁酸）真核細(xì)胞：磷脂雙分子層膜結(jié)構(gòu)（動(dòng)物細(xì)胞）或纖維素細(xì)胞壁（植物細(xì)胞）2.裂解作用機(jī)制三、標(biāo)準(zhǔn)操作流程1.哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解細(xì)胞收集：胰酶消化后離心（300×g,5min,4℃）裂解緩沖液：RIPA緩沖液（50mMTris-HClpH...2025-09-04
在生物實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。然而，配置過(guò)程中常因操作細(xì)節(jié)疏忽導(dǎo)致誤差。本文結(jié)合生物實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)，梳理標(biāo)準(zhǔn)溶液配置的常見(jiàn)問(wèn)題及規(guī)范操作，幫助實(shí)驗(yàn)人員規(guī)避錯(cuò)誤。一、生物實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)溶液的特殊要求溶質(zhì)選擇生物實(shí)驗(yàn)常用標(biāo)準(zhǔn)品（如蛋白質(zhì)、核酸）需低溫保存，配置前需室溫平衡，避免冷凝水影響稱量精度。酶類標(biāo)準(zhǔn)品需避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。溶劑與器皿核酸溶液需使用無(wú)RNase/DNase的槍頭、離心管，器皿需高溫滅菌或DEPC處理。蛋白質(zhì)溶液需避免使用強(qiáng)酸/強(qiáng)堿容器，...2025-08-26
一、血清沉淀物的成因1.脂蛋白變性胎牛血清中的脂蛋白在溫度驟變（如直接-20℃轉(zhuǎn)37℃解凍）時(shí)易發(fā)生變性聚集，形成白色絮狀物。研究表明，此類沉淀占解凍后沉淀總量的40%-60%。2.纖維蛋白析出低溫采集的血清殘留纖維蛋白原，解凍時(shí)轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，形成肉眼可見(jiàn)的1-2mm絮狀物。該現(xiàn)象在未完-全過(guò)濾的血清批次中尤為明顯。3.磷酸鈣結(jié)晶37℃環(huán)境下磷酸鈣溶解度降低，產(chǎn)生云霧狀沉淀，顯微鏡下呈現(xiàn)布朗運(yùn)動(dòng)的黑點(diǎn)，易被誤判為微生物污染。操作因素反復(fù)凍融導(dǎo)致脂質(zhì)聚集熱滅活（56℃以上）引...2025-08-19
一、核心定義干細(xì)胞療法是利用具有自我更新與多向分化潛能?的原始細(xì)胞，通過(guò)再生修復(fù)機(jī)制干預(yù)疾病的前沿技術(shù)。其核心在于：自我復(fù)制：無(wú)限增殖產(chǎn)生相同子代細(xì)胞；分化能力：在特定條件下轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞等功能細(xì)胞。二、來(lái)源與類型干細(xì)胞主要來(lái)源于三類途徑：胚胎干細(xì)胞取自早期胚胎，分化潛能最-強(qiáng)，但存在倫理限制。成體干細(xì)胞常見(jiàn)來(lái)源：胎盤、臍帶、骨髓、脂肪、牙髓等組織?；代表類型：間充質(zhì)干細(xì)胞（免疫原性低，可異體使用）。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）通過(guò)體細(xì)胞重編程技術(shù)獲得，規(guī)避倫理問(wèn)題。三...